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DNA甲基化檢測(cè)服務(wù)

簡(jiǎn)要描述:用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設(shè)計(jì)針對(duì)甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR。通過(guò)電泳檢測(cè)MSP擴(kuò)增產(chǎn)物,如果用針對(duì)處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴(kuò)增片段,則說(shuō)明該位點(diǎn)存在甲基化;反之,說(shuō)明被檢測(cè)的位點(diǎn)不存在甲基化。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-05-13
  • 訪  問(wèn)  量:7646

DNA甲基化修飾檢測(cè)服務(wù)

甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設(shè)計(jì)針對(duì)甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR。通過(guò)電泳檢測(cè)MSP擴(kuò)增產(chǎn)物,如果用針對(duì)處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴(kuò)增片段,則說(shuō)明該位點(diǎn)存在甲基化;反之,說(shuō)明被檢測(cè)的位點(diǎn)不存在甲基化。

亞硫酸氫鹽測(cè)序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設(shè)計(jì)BSP引物進(jìn)行PCR,在擴(kuò)增過(guò)程中尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶,zui后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序就可以判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化稱為BSP-直接測(cè)序方法。將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進(jìn)行測(cè)序,可以提高測(cè)序成功率,這種方法稱為BSP-克隆測(cè)序法。

高分辨率熔解曲線法(High Resolution Melting,HRM)

在非CpG島位置設(shè)計(jì)一對(duì)針對(duì)亞硫酸氫鹽修飾后的DNA雙鏈的引物,這對(duì)引物中間的片段包含感興趣的CpG島。若這些CpG島發(fā)生了甲基化,用亞硫酸氫鹽處理后,未甲基化的胞嘧啶經(jīng)PCR擴(kuò)增后轉(zhuǎn)變成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變,樣品中的GC含量發(fā)生改變,從而導(dǎo)致熔解溫度的變化。

DNA甲基化送樣要求:

細(xì)胞(≥106 個(gè))、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料,基因組DNA(體積≥20μl,濃度≥50 ng/μl)。

DNA甲基化提供結(jié)果:

引物序列、實(shí)驗(yàn)報(bào)告、包括MSP產(chǎn)物的電泳圖片;引物序列、測(cè)序峰圖、陽(yáng)性克隆質(zhì)粒和實(shí)驗(yàn)報(bào)告;擴(kuò)增曲線、熔解曲線及實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

 

 

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